产生组织切片非特异性染色的原因有哪些？如何解决？

1. 抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加背景着色，可通过缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。2. 一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色，建议试用单克隆抗体。3. 内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高（含血细胞多的组织），需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色。4. 非特异性组分与抗体结合，这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果。5. DAB孵育时间过长或浓度过高，可通过降低DAB浓度或者缩短孵育时间来降低背景染色。6. PBS冲洗不充分，残留抗体结果增强着色，在一抗/二抗/SP孵育后的洗涤尤为重要。7. 标本染色过程中经常出现干片，这容易增强非特异性着色，确保实验过程中保证切片的湿润。8. 抗体稀释液的pH值偏低和封闭血清的失效。